RFT2 ELISA實驗中，洗滌環節最常見的問題主要分為?結果異常類和操作異常類?，整理如下：

一、洗滌不充分導致結果異常（最常見）
這是洗滌環節占比最高的問題，會直接影響結果準確性：

整體背景偏高，空白孔異常顯色
未結合的酶標二抗或雜蛋白殘留未洗凈，殘留的酶會催化底物顯色，導致整體背景升高，掩蓋真實的弱陽性信號。
假陽性結果增加
殘留的非特異性吸附物質會與檢測系統發生交叉反應，或強陽性樣本殘留污染鄰近陰性孔，導致原本陰性樣本被誤判為陽性。
復孔重復性差，孔間變異大
手工洗板不均勻，或部分洗板機針孔堵塞，導致不同孔洗滌程度差異大，最終檢測結果變異系數超標，實驗重復效果差。
二、洗滌過度導致結果異常
信號強度降低，靈敏度下降
洗滌次數過多、Tween-20濃度超過0.2%時，會導致包被在固相上的RFT2抗原或特異性抗體解吸附，結合的目標復合物被洗脫，最終信號強度降低、靈敏度下降。
弱陽性信號被掩蓋
過度洗滌會洗脫低親和力的抗原抗體復合物，導致真實弱陽性樣本信號過低，被背景掩蓋出現假陰性結果。
三、操作層面常見問題
洗滌液配制錯誤
濃縮洗滌液未按比例稀釋，或結晶未溶解就直接使用，導致洗滌劑濃度不均勻，局部濃度過高損傷結合物；
誤用不符合體系的緩沖液（如AP酶系統誤用PBS而非要求的TBS），影響酶活性導致結果異常。
交叉污染
手工洗板時重復使用同一張吸水紙拍干，或倒液時孔內液體濺到鄰近孔，導致強陽性樣本污染陰性樣本，出現假陽性。
干孔問題
洗滌后抽吸過度或放置時間過長導致微孔干燥，會讓固相吸附的抗原抗體變性解吸附，導致結果完全異常。
洗板機維護不當導致問題
長期未校準洗板機，吸頭位置不對刮擦孔底破壞包被層；或針孔堵塞未疏通，導致部分孔加液不足洗滌不充分。